前期生涯
1595年(明万历二十三年)生于河南归德府永城县(今永城市马牧乡丁老家)的一个官宦世家。1619年(万历四十七年)中举人。1620年(万历四十八年)中进士，历任南京兵部主事、兵部郎中、太原知府、山东按察使右参政等军政要职。崇祯初年在任山东右参政时，因罪被贬为陕西副使。
平步青云
1636年(崇祯九年)宁夏兵变，丁启睿带兵逮捕了杀害巡抚王楫的六名首恶，安定了军心，因功升任右布政使，分守河南，跟随陕西巡抚孙传庭镇压农民起义军。1638年(崇祯十一年)冬，丁启睿升任右佥都御史，代孙传庭巡抚陕西。1640年(崇祯十三年)，督师杨嗣昌举荐丁启睿升任兵部右侍郎，代郑崇俭总督陕西三边军务，镇压农民起义。1641年(崇祯十四年)杨嗣昌去世，丁启睿升任兵部尚书，改称督师，又总督湖广、河南、四川及长江南北诸军，仍兼总督陕西三边军务。崇祯帝赐给丁启睿尚方剑、飞鱼服及印信。丁启睿受命出潼关，准备赴荆州接管杨嗣昌的军队。湖广巡按汪承诏却传檄说有贼寇在河南，荆州、襄阳不需要大军，汉水的船只全部藏起来不让丁启睿渡江。丁启睿转而到了邓州，邓州人全部关闭房门不接纳丁启睿;丁启睿去内乡，内乡长吏断了他们的粮。丁启睿的军队只能靠杀掉战马与野草一起充饥。当时李自成义军聚众七十万围攻开封，丁启睿害怕不敢援助开封，听说张献忠在光山、固始一带，军队很少，就跟诸将商量说：“皇上命我剿杀河南的贼寇，张献忠就是河南的贼寇。”就发布檄文令左良玉破麻城，击败张献忠一部，斩首一千二百人。开封告急，丁启睿则说：“我正与张献忠激战，不能去开封。”傅宗龙准备入关督秦师，丁启睿就乞求崇祯皇帝更改敕书，命令乃傅宗龙去攻打李自成。九月，傅宗龙败死于项城。李自成乘胜攻陷南阳，杀了唐王。十二月，李自成再围开封，河南巡抚高名衡急请丁启睿出兵，此时丁启睿身在许昌，而起义军正在攻打许昌，丁启睿才开始奔赴开封。在离开许昌城三十里时，许昌就被攻破。丁启睿害怕李自成部队攻打，偷偷溜进开封，李自成部队顺势攻击，开封差一点就沦陷。总兵陈永福射中李自成左眼，开封之围得解。1642年(崇祯十五年)四月，李自成第三次围攻开封，六月，崇祯皇帝任命侯恂督援剿诸军以救开封。侯恂还未至，开封之围更加急迫。崇祯皇帝连发了数道诏书责令丁启睿保卫开封，丁启睿才不情愿地调集左良玉、虎大威、方国安以及保定总督杨文岳等部援救开封，七月各部在朱仙镇会师。李自成率部百万，丁启睿想尽快开战，左良玉认为敌军锋芒正旺，不能攻打，丁启睿不听。明军数战不利，左良玉违令带军夜奔襄阳。丁启睿与杨文岳逃奔汝宁，李自成部队追击了400余里，明军死伤无数，丁启睿的敕书、尚方剑、印绶全部丢失去。崇祯皇帝大怒，将其革职待命。九月，李自成部掘开马家口河灌开封，开封失陷，崇祯皇帝才给他个小官当，后来又被释放回原籍。
明亡之后
1644年(明崇祯十七年、清顺治元年)李自成攻陷北京，崇祯皇帝自缢，明朝灭亡，福王朱由崧在丁启睿伯父丁魁楚等人的拥立下在南京即位，史称南明。丁启睿攀缘阉党分子马士英，总督河南，负责劝农、剿寇事务，曾经擒斩李自成任命的归德府官员，官拜兵部尚书，加封太子太保，并为其一子授予官位。 1645年(南明弘光元年、清顺治二年)福王政权被清军攻灭后，丁启睿投降清朝。
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