1941年4月6日，德军实施"第25号计划"，1941年4月17日，南斯拉夫王国政府代表在投降书上签字。经过短短的10天，南斯拉夫作为统一的主权国家已不复存在，成为沦陷于法西斯的第12个欧洲国家。铁托领导南共和人民进行反法西斯斗争，为武装起义作准备。4月底，他召开南共中央委员会会议，在会上作关于全国形势的详细报告。会议提出反对侵略者的起义问题，确立了民族解放阵线的基础。
1941年6月22日，德国突袭苏联，德军取得了苏德战争初期的巨大 胜利。欧洲的其余部分，除了英国，都在希特勒的控制之下，欧洲成了希特勒的欧洲。在这第二次世界大战最危急的时刻，南斯拉夫的起义爆发了。南斯拉夫人民在以铁托为首的南共领导下与法西斯作斗争。1941年6月27日，南共中央成立南斯拉夫人民游击司令部，铁托任总司令。此后几个月内，游击司令部所统率的部队已达8万，开辟了一系列敌后根据地。1941年9月18日，铁托从首都贝尔格莱德平安进入解放区，成为南斯拉夫人民反法西斯战场上的军事统帅。不久，游击队攻占乌日策城，建立了象征性的乌日策共和国。
为了壮大反法西斯的力量，铁托积极争取另一支具有抵抗思想的队伍--前南斯拉夫军德拉查·米哈依治维奇上校领导的切特尼克(意为军队)。铁托先后两次(1941年9月19日，1941年10月27日)亲自去切特尼克控制的地区与米哈依洛维奇会晤，提出双方联合作战、设立联合作战参谋部等建议。铁托与米哈依洛维奇会晤后不久，德军开始进攻乌日策，飞机、坦克、步兵协同作战，互相配合。双方力量对比悬殊，游击队虽经抵抗，但最后不得不撤出乌日策。
1941年12月，铁托组建了第1无产者旅，其后，另外4个无产者旅也相继成立。这是一种以队员的高度纪律性和作战的特殊方式而著称的游击队组织。他们作为突击部队，不受地区的限制，可以调往任何战线，是南斯拉夫人民武装的中坚力量。
1942年，德军进攻解放区，南斯拉夫人民反抗法西斯的斗争进入最困难时期。铁托率领游击队在无任何外援的情况下孤军奋战，进行了南斯拉夫游击队的"长征"，向北长途行军200英里而到达波斯尼亚西部解放区，连续打退敌人的多次进攻，摆脱了绝境。在6月份的苏捷斯卡战役中，铁托一行遭到德机轰炸，只是由于他的爱犬卢克斯舍身相救，铁托才死里逃生，仅负轻伤。
1943年，世界军事形势发生了巨大变化，苏军在东线转入进攻，盟国已把隆美尔赶出北非，意大利法西斯被迫无条件投降，德国法西斯的最后失败已成定局。1943年11月29日被定为南斯拉夫的国庆日。会议通过决议剥夺了伦敦流亡政府作为南斯拉夫政府所拥有的权力，铁托被授予南斯拉夫元帅军衔，并当选为南斯拉夫人民委员会(即临时政府)主席和国防人民委员。
1944年夏，南斯拉夫人民解放军发展壮大，几战皆捷。德军司令部不甘失败，准备袭击驻在德瓦尔城的南斯拉夫人民解放军和游击队最高统帅部，企图使南斯拉夫反法西斯武装力量陷于群龙无首的境地。“跳马”计划定于铁托的生日(5月25日)实施，主力是由500名犯了军法的党卫军人员组成的空降营。这些人获准参与这次特别危险的战斗以立功赎罪，每人发有一张铁托的照片，奉令尽可能活捉他。
1944年5月25日清晨，德国空军轰炸机群和战斗机群飞抵德瓦尔城，对毫无准备的整个城市和市郊进行狂轰滥炸。德国人仅缴获了铁托的一套新制服和一双长统靴。作为英国联络官而降落在解放区的英国丘吉尔首相之子伦道夫·丘吉尔也安然脱险。
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