西元前44年，为了拯救卡雷会战中被俘虏的九千名罗马士兵，凯撒宣布将远征帕提亚。但是，当时的占卜师说“只有王者才能征服帕提亚”，此举更加深共和派议员的不安，认为凯撒终将称王。
二月，在一项典礼上，执政官安东尼将花环献给凯撒，并称呼凯撒为王。虽然凯撒拒绝，反凯撒一派更为恐惧，于是策划谋杀凯撒。参加反对凯撒的阴谋的大约有60多人，为首的是盖乌斯·卡西乌斯、马可斯·布鲁图斯、德基摩斯·布鲁图斯。他们称自己为解放者，这些人在刺杀凯撒前曾和卡西乌斯会面，卡西乌斯告诉他们说如果东窗事发他们就必须要自杀。
在西元前44年3月15日，一群元老叫凯撒到元老院去读一份陈情书，陈情书是元老写来要求凯撒把权力交回议会。可是这陈情书是假的。当马克·安东尼从一个叫做卡斯卡的解放者那里听到消息，他赶紧到元老院的阶梯上要阻挡凯撒。可是这些参与预谋的元老在[{link-en|庞培剧院| Theatre of Pompey}}前先找到了凯撒，把他领到了剧院的东门廊。凯撒在读这假的陈情书的时候，卡斯卡把凯撒的外套给脱开然后用刀刺向他脖子。凯撒警觉到卡斯卡，转过身抓住卡斯卡的手，用拉丁语说：“恶人卡斯卡，你在作什么?”被吓到的卡斯卡转向其他元老，用希腊语说：“兄弟们，帮我!”。一下子包含布鲁图斯的所有人都开始刺向凯撒。凯撒想要脱逃，可是因为血流太多眼睛看不见所以摔倒，最后这些人在他倒在地上的时候把他杀害了。
根据史学家尤特罗匹斯的说法，当时有六十多人参与这谋杀。在莎士比亚的剧作中，凯撒在元老院就座时，阴谋者全都向他围拢过来。提留斯·辛布尔立即走到凯撒身边，好像要问什么，却乘势抓住他的托迦双肩。此时，凯撒的颈部被一个叫卡斯卡的人刺中。凯撒用铁笔戳进被其抓住的卡斯卡的手臂，却又被刺伤。当他发现，四面八方都受到匕首的攻击时，特别是看到马可斯·布鲁图斯扑向他的时候，他便放弃了抵抗，只对着马可斯·布鲁图斯用希腊语说了一句： “还有你吗，布鲁图?，便倒了下去。
就这样，凯撒被刺中23刀(其中仅有一处是致命伤)，倒在了庞培的塑像下，以最后一口气将罩衫覆面(凯萨所任的终生职神祇官所规定的赴死装扮法)后气绝身亡。阴谋者本想把他的尸体投入台伯河但是慑于执政官马克·安东尼和骑兵长官雷必达而没有这么做。凯撒的遗嘱是按照其岳父的要求，在马克·安东尼的家中启封宣读的。
这份遗嘱是在前一年的9月13日立下的，并一直保存在维斯塔贞女祭司长手里。在这份遗嘱中，凯撒指定自己姐姐的三个孙子为自己的继承人：给屋大维四分之三的财产，其余四分之一由鲁基乌斯·皮那留斯和克文图斯·佩蒂尤斯分享;为自己可能出世的孩子指定了监护人，其中几个竟是参与阴谋的凶手;还指定屋大维为自己的家庭成员，将自己的名字传给他，并规定德基摩斯·布鲁图斯为第二顺序继承人;此外，他还把台伯河的花园留给人民公用，并赠予每个公民300塞斯特尔提乌斯。阴谋刺杀他的人中间，几乎没有谁在他死后活过3年的。所有人都被判有罪，并以不同方式死于非命：一部分人死于海难，一部分人死于屋大维和其他凯撒部将随后发动的战争，有些用刺杀凯撒的同一把匕首自杀。凯撒死时58岁，死后被按照法令列入众神行列，被尊为“神圣的儒略”。2012年10月，西班牙考古学家宣布，于罗马发现奥古斯都在凯撒遭刺地点树立的混凝土柱子。
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