六角定赖(1495年-1552年1月21日)，六角高赖次子，日本战国时代近江国守护大名，官至从四位下弹正忠，谥号江云，法名云光寺殿光室亀公大居士。
永正十七年(1520年)10月六角高赖病故，次子六角定赖继承家督之位，当时京都政局极度混乱，控制了近江北部的浅井亮政也想染指南部，定赖就任近江守护后对两方的情况都十分关注，京都方面足利义材(义稙)一系的足利义晴被拥立后，与义晴对立的三好长庆退入近江，定赖算得上是一代英主，他审时度势遂与摄津细川晴元联盟协助义晴与三好氏作战，巧妙的打破了自己与三好氏和浅井氏两面对敌的状况，可以专心进行近江攻略。义晴病逝后定赖支援足利义辉，在中央幕府政权的行政之中，影响力占统治性的地位，保卫了京都的安定。与此同时，六角定赖开始频频发动对浅井氏的攻势，大永五年(1525年)包围小谷城大破浅井亮政，亮政被迫逃往美浓;享禄四年(1531年)、天文七年(1538年)，又于琵琶湖北岸击破浅井军势，亮政不得不暂时降伏，成为其附属大名，六角家一时名震天下。天文十八年(1549年)建筑位于南近江要冲之地观音寺山的观音寺城本丸四层，天文二十一年(1552年)一月，功成名就的定赖亡故，享年五十八岁。
六角定赖于永正元年(1504年)在京都相国寺出家为僧，称吉侍者。由于其兄六角氏纲在永正15年(1518年)在与细川家的战争中阵亡，定赖被迫还俗继承家业，六角定赖是六角氏的一代英主，率军降伏了浅井家(浅井久政)，成为南近江国霸主，并修建了观音寺城。
在内政上，率先推出“城割”的命令，要家臣们各自毁掉原有的居城，全部集中于观音寺城，以方便管理。这道“城割”命令，被认为是后来出现的一国一城令的雏形。 同时也是第一位实施乐市的大名，使观音寺城的城下町成为众商云集的商业都市。 在外交上，以足利将军支持者的身份，介入当时室町幕府的中央政治。也以政治联姻的方式，让自己的子女跟各邻国大名联姻。 在定赖的这段领导期间，六角家达到了最全盛的时刻。
1552年去世后，其子六角义贤继位。
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