查士丁尼王朝(518~610)，东罗马帝国的第三个王朝，由查斯丁一世(又译查士丁一世)开创，因查士丁尼一世而得名，终结于福卡斯，共计有6个皇帝，统治92年。 另说将最后一位君主福卡斯单列为"福卡斯王朝"的君主，则查士丁尼王朝计有五帝，统治84年。
自查士丁一世起，所有查士丁尼王朝皇帝均没有子嗣，故帝位并非在直系血亲间传承。
查斯丁一世出身行伍，据说目不识丁(据普罗科比记载，其担任皇帝期间由于不会签名，需要借助于"图章")，依靠战功及忠诚升任阿纳斯塔修斯一世的近卫军队长(普罗科比《战记》一书中有关于其参加波斯战争的记录)。因此在阿纳斯塔修斯身后的政治角逐中举足轻重，在查士丁尼建议下用策利用形势登上皇帝宝座(登基时六十八岁)。此后任命外甥为凯撒、共治皇帝，并最终传位于外甥。
鼎盛期
6世纪时，东罗马的主要敌人是它的传统老敌人:波斯人(萨珊王朝)、斯拉夫人和保加尔人。神学的争论，比如对基督一性论的争论，也是帝国的重要话题。但东部帝国并没有忘记它在西部的根。在查士丁尼一世和他杰出的将军贝利萨留的领导下，东罗马帝国甚至夺回了它部分在西部丧失的省份:意大利的大部份地区、北非和西班牙。具体包括亚平宁半岛、利比亚、突尼斯、今阿特拉斯山脉以北的阿尔及利亚和今天摩洛哥的丹吉尔和伊比利亚半岛最南端。
查士丁尼重编了古罗马的法规，制定了《民法大全》。值得注意的是:这部法典是用拉丁语写的，而当时拉丁语已被认为是一种古老的语言了，甚至许多写这部法典的人都不太会说这种语言。
530年代，在查士丁尼的统治下，圣索非亚大教堂(其原名Hagia Sophia是希腊语"神圣智慧"之意)开始动工。这座教堂后来成为拜占庭宗教生活和东正教的中心。
衰落期
查士丁尼一世在位时，王朝势力达到顶峰，但是很快就衰落。
查士丁尼一世给他的继承人留下了一个空空的国库，而他的继承人也无法对付所有边境上突然出现的新敌人。在查士丁尼时代，最早的斯人(542年)、阿瓦尔人(557年)就已经穿越了多瑙河。由于帝国的重兵集结在东部边境，以对抗依兰沙赫尔，因此他们得以从帝国的西北部趁虚而入。斯拉夫人打垮了驻扎在伊斯特拉半岛上的帝国军队，并夺取了亚得里亚海沿岸的所有主要城市，摧毁了多瑙河以南的帝国防务体系。此时西班牙和意大利也面临着蛮族起义的威胁。伊比利亚半岛上的君主制国-西哥特人(418-711年)对帝国属地发动全面进攻，将罗马的力量逐出伊比利亚半岛，东哥特人随即在意大利发动叛乱，伦巴底人于568年入侵亚平宁半岛并建立了伦巴第王国，只给帝国留下亚平宁半岛南端的一部分，以及拉文纳与罗马之间一块不安全的地区。
祸不单行的是，几场猛烈的瘟疫也袭击了东罗马的领土。公元541年，鼠疫开始在东罗马帝国属地中的埃及爆发，接着便迅速传播到了首都君士坦丁堡及其它地区。
当时出现了许多诡异恐怖的情景:当人们正在相互交谈时，便不能自主地开始摇晃,然后就倒在地上;人们买东西时，站在那儿谈话或者数零钱时，死亡也会不期而至。而最早感染鼠疫的是那些睡在大街上的贫苦人，鼠疫最严重的时候，一天就有5000到7000人，甚至上万人不幸死去。
官员在极度恐惧中不得不向查士丁尼汇报，死亡人数很快突破了23万人，已经找不到足够的埋葬地，尸体不得不被堆在街上，整个城市散发着尸臭味。查士丁尼自己也险些感染瘟疫，在恐惧之中，他下令修建很多巨大的能够埋葬上万具尸体的大墓，并以重金招募工人来挖坑掩埋死者，以阻断瘟疫的进一步扩散。于是，大量的尸体不论男女、贵贱和长幼，覆压了近百层埋葬在了一起。鼠疫使君士坦丁堡40%的城市的居民死亡。它还继续肆虐了半个世纪，直到1/4的罗马人口死于鼠疫。这次鼠疫引起的饥荒和内乱，彻底粉碎了查士丁尼的雄心，也使东罗马帝国元气大伤，走向崩溃。
王朝灭亡
末期的王朝先后经历了莫里斯(582-602)和福卡斯(602-620)的统治。由于外敌入侵和内部纷争，帝国从极端无能的状态进入完全无政府主义的时代。最后，查士丁尼王朝终于被希拉克略王朝取代。
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